白蛋白是藥物遞送領(lǐng)域中最為通用的蛋白質(zhì)載體,具有無毒、無免疫性、易純化、溶于水、易注射給藥的特點?；谄涓呱锵嗳菪院蜕锝到庑缘膬?yōu)勢,白蛋白成為了藥物載體的最佳候選人,常將白蛋白制成納米粒用于藥物載體領(lǐng)域。與其他藥物載體相比,納米粒擁有更大的比表面積,粒徑尺寸較小,一般位于10-1000nm。由于本身特有的量子特性以及吸附和負(fù)載其他化合物的能力,在醫(yī)藥治療領(lǐng)域中納米粒受到了極大的歡迎?；诂F(xiàn)有技術(shù)中,多以載藥為目的設(shè)計藥物載體,載體本身缺乏藥物活性這一問題,我們進(jìn)行了本論文的研究。本論文以牛血清白蛋白（BSA）為主要原料,選擇具備抗癌活性的肉桂提取物肉桂醛（CA）為藥物分子,對CA進(jìn)行修飾。將CA與氨茴酰肼（AH）反應(yīng)得到具有特征性腙鍵的肉桂醛衍生物（CAH）,使其能在癌細(xì)胞的弱酸環(huán)境中斷裂腙鍵釋放CA。將CAH作為藥物活性分子與BSA表面活性位點即氨基酸殘基上的羧基結(jié)合,通過去溶劑化法和化學(xué)交聯(lián)法結(jié)合制備得到BSA-CAH NPs,對制備路線進(jìn)行優(yōu)化,得到最佳制備條件為:H2O:Et OH=6:1,m（BSA）:m（CAH）=24:1,反應(yīng)溫度為25℃下,非超聲環(huán)境,反應(yīng)時間為3 h。通過一系列測試對制備出的產(chǎn)物進(jìn)行基礎(chǔ)表征。采用紅外光譜、核磁共振光譜等方法對反應(yīng)得到的CAH進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征。通過比色法及紫外分光光度法確定在弱酸性（p H4.0-5.0）環(huán)境中,CAH會自發(fā)斷裂釋放出具有抗癌活性的CA,具有p H敏感性。對制備得到的白蛋白納米粒進(jìn)行一系列的表征,如Zeta電位測試、GPC測試、原子力顯微鏡測試及透射電鏡測試,可知BSA-CAH NPs的等電點高于BSA,約56個CAH與1個BSA結(jié)合,載藥率為36.615 mg/g,在體外模擬實驗中p H4.5條件下CA的釋放率為96.6%。納米粒呈圓形顆粒狀,尺寸分散良好,粒徑為156nm,PDI 0.313。為了確定制備納米粒前后牛血清白蛋白結(jié)構(gòu)的變化,對其進(jìn)行圓二色光譜測試、熒光測試、紫外分光光度法測試及固體核磁測試,對修飾前后的蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)變化進(jìn)行分析。最后對BSA-CAH NPs進(jìn)行細(xì)胞攝取觀察及其對不同癌細(xì)胞的細(xì)胞抑制率檢測,雖然制備得到的BSA-CAH NPs納米粒對不同的癌細(xì)胞都有一定的抑制率,但對其中一些癌細(xì)胞作用效果較強(qiáng),可以用于人喉鱗癌的針對性治療。本論文的創(chuàng)新之處:我們選擇了一種具有抗癌能力的藥物分子CA,使其與AH反應(yīng)得到具有腙鍵的CAH。腙鍵可以在弱酸性及強(qiáng)堿性條件下斷裂并釋放出具有藥物活性的CA。通過去溶劑化法與化學(xué)交聯(lián)法結(jié)合將CAH與BSA以酰胺鍵為橋梁制備成一種特殊的具備抗癌活性的白蛋白納米粒藥物載體,共價結(jié)合的CAH可以在腫瘤特有的弱酸性內(nèi)環(huán)境中實現(xiàn)對CA的釋放,具有p H敏感性,其本身具備一定的抗癌能力,且制備方法在實驗室中操作易實現(xiàn),無毒,可降解,具有極高的應(yīng)用價值。
基本信息
| 題目 | 白蛋白作為藥物載體的研究 |
| 文獻(xiàn)類型 | 碩士論文 |
| 作者 | 常書華 |
| 作者單位 | 齊魯工業(yè)大學(xué) |
| 導(dǎo)師 | 秦大偉 |
| 文獻(xiàn)來源 | 齊魯工業(yè)大學(xué) |
| 發(fā)表年份 | 2020 |
| 學(xué)科分類 | 工程科技Ⅰ輯 |
| 專業(yè)分類 | 有機(jī)化工 |
| 分類號 | TQ460.4 |
| 關(guān)鍵詞 | 肉桂醛,白蛋白納米粒,敏感性,抗癌活性 |
| 總頁數(shù)： | 73 |
| 文件大?。?/td> | 3645k |
論文目錄
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 緒論 |
| 1.1 白蛋白概述 |
| 1.1.1 牛血清白蛋白的結(jié)構(gòu) |
| 1.1.2 白蛋白的可修飾性 |
| 1.2 白蛋白納米粒的制備方法 |
| 1.2.1 化學(xué)法 |
| 1.2.2 物理法 |
| 1.3 白蛋白納米粒在藥物制劑領(lǐng)域的應(yīng)用 |
| 1.3.1 白蛋白納米粒的優(yōu)勢特征 |
| 1.3.2 白蛋白納米粒與藥物遞送的關(guān)系 |
| 1.3.3 白蛋白納米粒的靶向性 |
| 1.4 本論文的研究內(nèi)容及創(chuàng)新點 |
| 1.4.1 采用的研究方法和步驟 |
| 1.4.2 本論文的創(chuàng)新之處 |
| 第2章 BSA-CAH NPs的制備 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 實驗儀器與試劑 |
| 2.2.1 實驗儀器 |
| 2.2.2 實驗藥品或試劑 |
| 2.3 BSA-CAH納米粒的制備 |
| 2.3.1 肉桂醛衍生物CAH的制備 |
| 2.3.2 BSA-CAH納米粒的制備 |
| 2.4 BSA-CAH納米粒制備路線的優(yōu)化 |
| 2.4.1 BSA/CAH投放量對納米粒的粒徑及分散度的影響 |
| 2O/EtOH的體積比對納米粒的粒徑及分散度的影響'> 2.4.2 H2O/EtOH的體積比對納米粒的粒徑及分散度的影響 |
| 2.4.3 反應(yīng)時間對納米粒的粒徑及分散度的影響 |
| 2.4.4 反應(yīng)溫度對納米粒的粒徑及分散度的影響 |
| 2.4.5 超聲環(huán)境對納米粒的粒徑及分散度的影響 |
| 2.5 納米粒的基礎(chǔ)表征 |
| 2.5.1 CAH的紅外光譜測試 |
| 2.5.2 CAH的核磁共振氫譜測試及碳譜測試 |
| 2.5.3 CAH的pH敏感性測試 |
| 2.5.4 BSA-CAH NPs的粒徑及Zeta電位測試 |
| 2.5.5 BSA-CAH NPs的 GPC測試 |
| 2.5.6 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)測試 |
| 2.6 結(jié)果與討論 |
| 2.6.1 BSA/CAH投放量對納米粒的粒徑及分散度的影響 |
| 2O/EtOH的體積比對納米粒的粒徑及分散度的影響'> 2.6.2 H2O/EtOH的體積比對納米粒的粒徑及分散度的影響 |
| 2.6.3 反應(yīng)時間對納米粒的粒徑及分散度的影響 |
| 2.6.4 反應(yīng)溫度對納米粒的粒徑及分散度的影響 |
| 2.6.5 超聲對納米粒的粒徑及分散度的影響 |
| 2.6.7 CAH的紅外光譜測試和核磁共振測試 |
| 2.6.8 CAH的pH敏感性測試 |
| 2.6.9 BSA-CAH NPs的 Zeta電位測試 |
| 2.6.10 BSA-CAH NPs的 GPC測試 |
| 2.6.11 牛血清白蛋白結(jié)構(gòu)變化 |
| 2.7 本章小結(jié) |
| 第3章 BSA-CAH NPs的形貌表征和性能研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 實驗儀器與試劑 |
| 3.2.1 實驗儀器 |
| 3.2.2 實驗藥品或試劑 |
| 3.3 表征方法 |
| 3.3.1 形貌表征 |
| 3.3.2 CAH的負(fù)載率及釋放率 |
| 3.3.3 貯藏穩(wěn)定性測試 |
| 3.3.4 細(xì)胞攝取觀察 |
| 3.3.5 MTT測試 |
| 3.4 結(jié)果與討論 |
| 3.4.1 形貌表征 |
| 3.4.2 CAH負(fù)載率及釋放率測試 |
| 3.4.3 貯藏穩(wěn)定性測試 |
| 3.4.4 細(xì)胞攝取觀察 |
| 3.4.5 MTT測試 |
| 3.5 本章小結(jié) |
| 第4章 結(jié)論與展望 |
| 4.1 結(jié)論 |
| 4.2 展望 |
| 參考文獻(xiàn) |
| 致謝 |
| 攻讀碩士期間的主要科研成果 |
參考文獻(xiàn)
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